蛋白质羰基含量检测试剂盒说明书 
蛋白质羰基含量检测试剂盒描述： 蛋白质羰基是由氨基酸残基侧链中的氨基或亚氨基受到自由基攻击后转变而来，在体内主要通过
金属离子催化氧化系统形成，是多种氨基酸在蛋白质氧化修饰过程中的早期标志。羰基化蛋白极易相
互交联、聚集为大分子从而降低或失去原有蛋白质的功能，其含量能够反应蛋白质氧化损伤的程度，
可作为衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。
蛋白质羰基能够与 2,4-二硝基苯肼反应生成红色 2,4-二硝基苯腙沉淀，产物在 370 nm 处具有特
征吸收峰，通过吸光值的变化即可定量检测蛋白质羰基的含量。
需自备试剂：乙酸乙酯（C4H8O2，MW=88.10，CAS: 141-78-6）；无水乙醇（C2H6O，MW=46.07，CAS: 64-17-5）
测定过程中所需要的仪器和试剂：紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研钵
/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱、乙酸乙酯、无水乙醇和蒸馏水。
①组织：按照组织质量（g）：提取液 A 体积（mL）为 1：（5-10）的比例（建议称取 0.1 g 组织，
加入 1 mL 提取液 A）处理样品，冰浴匀浆，4℃ 5000 rpm 离心 10 min，取全部上清至离心管中，加
入 0.1 mL 提取液 B，室温静置 10 min，4℃ 12000 rpm 离心 10 min，取上清即为待测样本，置于冰上
待测。 ②细菌或细胞：离心收集细菌或细胞至离心管内，按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液 A 体积
（mL）为（500-1000）：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1 mL 提取液 A）处理样品，冰浴超声
破碎（功率 300 W，超声 3 s，间隔 7 s，总时间 3 min），4℃ 12000 rpm 离心 10 min，取上清即为待测
样本，置于冰上待测。 ③血清、培养液等液体样本：直接测定或适当稀释后再进行测定。
测定步骤： ①分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长至 370 nm，试剂五调零。 ②在离心管中依次加入下列试剂（避光条件下进行） 
吸光值测定：取 200 μL 反应液于 96 孔板或微量石英比色皿，测定 370 nm 处吸光值，记为 A 测
定和 A 对照，计算 ΔA 测定=A 测定-A 对照。注：每个样品均需设一个对照组
蛋白质羰基含量检测试剂盒说明书含量计算： 
注释：VS5：反应体系中加入试剂五的体积，0.3 mL；V1：组织样品提取后总体积，1.1 mL；V2：
细菌或细胞样本提取后总体积，1 mL；V 样：反应体系中加入待测样本的体积，0.06 mL；ε：蛋白质
羰基消光系数，22 mL/µmol/cm；d：96 孔 UV 板光径，0.5 cm；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样
品质量，g；细菌或细胞数量：以万计。 
注意事项： ①提取液 B 应根据使用量现用现配，配置后置于 4℃保存，若变为黑色则停止使用； ②试剂一见光易分解，反应过程需在避光条件下进行； ③试剂四为沉淀洗涤液，需重复加入三次对沉淀进行洗涤； ④为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准），
确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定，
过程中问题请您及时与工作人员联系。
蛋白质羰基含量检测试剂盒
文章来源：http://www.shyx-bio.com/newss-181.html |
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